25.解析：(1)E.coli DNA连接酶可将具有互补钻性末端的DNA片段连接起来。切制质粒时，EcoR I能将启动子CadR切割，不能逸用，SulI位于终止子外，不能选用，所以只能选用MunI和XhoI切割质粒，产生不同的黏性末端，以保证质粒与目的基因高效重组。(2)根据图中目的基因(EGFP基因)的偏码熊的方向及质粒中启动子方向可知，需要将编码链的5端靠近启动子，由于目的基因(EGFP基因)中含有MunI的酶切位点，所以不能用MunI切割目的基因所在片段，但EcoR I与MunI切割产生的黏性末端相同，所以可以在设计引物的时候添加EcoR I的识别序列，同时为使EGFP基图能正常表达且表达正确，应在EoRI识别序列的3'端添加5'-ATG-3'序列，并且5-ATG3序列应和EGFP基因之间无其他序列，所以应选引物PI和P2进行P(R,且在P2的5'端增加碳基序列5'-GAATTCATG-3。(3)不同DNA分子的大小和构象不同，在凝胶中的迁移速率不同，所以通过琼脂糖凝胶电泳可将不同的DNA片段区分开来。造当提高PCR中复性过程的温度，可减少引物和模板不完全配对现象，从而减少非特异性条带的产生。（4)LacZ基因编码产生的B半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，重组质粒中导入了目的基因，则LucZ基因缺失，使其不能产生B-半乳糖苷酶，底物Xgal不会被分解，菌落为白色。所以为进一步鉴定该生物传感器是否制备成功，需要选取白色菌落，接种到含Cd的培养基上，观察是否有绿色荧光出现。答案：（除注明外，每空2分，共13分）8(1)将具有互补黏性末端的DNA片段连接起来MunI和XhoI(2)P2 GAATTCATG(3)不同DNA分子的大小和构象不同，在凝胶中的迁移速率不同提高(1分)(4)选取白色菌落，接种到含Cd的培养基上，观察是否有绿色荧光出现
